PCR實驗室核酸檢測常見六大問題

①新冠試劑出現翹尾，怎么處理？

答：如果是個別單一通道翹尾，不管是FAM還是VIC通道，首先按照要求復查，復查建議重新采樣，如果不方便重新采樣建議對原有樣本進行重新提取核酸驗證，如果復查陰性判讀陰性，如果復查還是同一通道翹尾，就要對結果仔細審核，一是要排除實驗室污染，二是要對病人信息了解清楚，從臨床癥狀及接觸史排查，如果沒法確認，建議必須重新采樣復查，如有必要可以采用另一家試劑來驗證。如果出現大量的弱陽性擴增翹尾，首要原因是考慮實驗室污染，可以通過做環境樣本和陰性對照做驗證排除。

②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因嗎，靈敏度哪個更高？是否會和其他冠狀病毒片段重疊？

答：N基因跟1ab都是特異的，不會跟其他呼吸道病原體交叉反應。設計時候，兩個基因的序列不一樣，導致靈敏度不一樣，N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。

③新冠檢測結果和臨床診斷不符合，怎么解讀？

答：新冠病毒由于是RNA病毒，容易降解，另外檢測結果也和取樣，核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關，需要逐一分析，同時可以結合臨床癥狀判讀。

④采用生理鹽水做陰性對照，內標也會增長，怎么解釋？

答：因為試劑采用的是內源性內標，內源性內標是用人源基因標記，此基因存在于人的表皮細胞內，操作過程中就可能會出現人源性的污染，另外環境污染也有可能導致內標增長，這也是前面提到的建議做環境樣本質控。

⑤新冠樣本內標不出如何處理？

答：如果新冠樣本內標不出，該樣本必須復查，可重新混勻該樣本提取核酸，如果重新提取該樣本內標還是不出，在排除提取問題的情況下，說明采樣不合格，要通知臨床重新采樣復查。

⑥采集環境樣本檢測新冠狀病毒，為啥大部分樣本內標不出，偶爾個別樣本檢測出內標？

答：因為新冠試劑檢測的是人內源性內標，環境樣本一般不含有人源細胞，所以檢測不出內標；偶爾檢出內標，可能該環境樣本上有人源性細胞粘附，故而檢出內標。